استريليزاسيون وسايل آزمايشگاهي

[Mahdi Eng 22940]

استريليزاسيون وسايل آزمايشگاهي

 

 

 

1- تمامي ظروف آزمايشگاه ميكروبي از قبيل پتري ديشها، پيپتها را در ظروف مخصوص خود قرار داده و محيط كشت ها تهيه شده مورد نياز را در داخل اتوكلاو قرار مي‌دهيم

 

2- اتوكلاو را روشن كرده و زمان آن را روي 20 دقيقه تا فشار 1Bar تنظيم مي كنيم تا مراحل استريليزاسيون انجام گردد و اتوماتيك وار بعد تمام شدن مراحل دستگاه خاموش مي شود . (فور 160 درجه سلسيوس)

 

ب) طرز تهيه محيط كشتها:

 

1- جهت تهيه محيط كشت ميزان مورد نياز ماده براي حل شدن در 1000cc آب مقطر نوشته شده كه اگر بخواهيم كمتر از اين مقدار تهيه كنيم با استفاده از تناسب ماده مي‌توان ميزان مورد نياز ماده جهت حل كردن در آب مقطر را تخمين زد. پس از تهيه محيط كشت ارلن را روي هيتر قرار مي‌دهيم تا كاملاً حل و شفاف شود سپس از روي هيتر برداشته و با پنبه و فويل درب محيط كشت را مي‌بنديم.

 

 

 

 

 

براي مثال :

 

پليت كانت آگار P.C.A : 1.20 گرم در 100 ميلي ليتر است كه اگر بخواهيم براي 50cc تهيه كنيم ، 50 را ضربدر 1.20 كرده وبر 1000 cc تقسيم مي كنيم وعدد بدست آمده را وزن كرده ودر بشر با آب مقطر به حجم 50 سي سي مي رسانيم سپس تا موقعي كه شفاف شود در روي هيتر نگه مي داريم ودر داخل بشر مگنت مي اندازيم تا مخلوط شود ودر هنگام جوشيدن كه كف هايي توليد كرد آنرا از روي هيتر برمي داريم .( آب مقطر را بايد قبلا به جوش برسانيم

 

در صورتيكه محيط كشت مصرفي SDA باشد به آن كلرامفتيكل (5/0 درصد) اضافه مي‌كنيم.

 

محيط كشتهايي كه در آزمايشگاه ميكروبي كاربرد دارند عبارتند از:

 

1- پليت كانت آگار يا (pc) جهت شمارش كلي ميكروارگانيم

 

2- سابروز دكستروزگار (SDA) يا محيط (WGC) جهت كپك و مخمر

 

3- اورنج سرم‌آگار (OSA) جهت اسيدوفيلها

 

4- مك كانگي‌آگار جهت شمارش كليفرم‌ها

 

ج)استريل كردن محيط كشتها:

 

ابتدا اتوكلاو را تا صفحه زير ديگ آن آب ريخته و ارلنهاي حاوي محيط كشت را در ديگ اتوكلاو گذاشته و سپس درب آنرا مي‌بنديم شير تخليه بخار را با وصل نمودن دستگاه به برق باز مي‌كنيم تا هواي داخل آن خارج شود پس از خارج شدن هوا و مشاهدة بخار شير تخليه را بسته و اجازه مي‌دهيم تا فشار به 15psi (يك bar ) برسد پس از رسيدن به فشار مورد نظر در صورت كاهش وصل مي‌گردد تا رنج ثابت بماند پس از ثابت شدن فشار بمدت 20-15 دقيقه زمان استريل خواهد بود و پس از مدت تعيين شده دستگاه را خاموش و شير تخليه را باز و آنرا سرد مي‌كنند و محيط كشتها آماده مصرف مي‌باشد.

 

 

 

روش كار انجام آزمايشات ميكروبي:

 

1- نمونه‌برداري و انتقال به آزمايشگاه ميكروبي

 

2- استريل كردن ميز آزمايش ميكروبي با الكل 70 درصد (قبل از كار در آزمايشگاه بايد سطوح توسط لامپ UV به مدت 20 دقيقه استريل شود) همچنين استريل كردن نمونه‌ها با الكل (اگر به صورت بسته‌بندي باشند).

 

3- روشن كردن چراغ الكلي در دو طرف ميز (سمت راست و چپ)

 

4- خارج كردن پليتها از ظروف مخصوص خود و گذاشتن آنها ما بين چراغهاي الكلي و نوشتن مشخصات بر روي آنها (نوع محيط كشت، تاريخ، نوع محصول، شماره دستگاه)

 

5- بازكردن نمونه‌ها با قيچي استريل و برداشتن آنها به اندازه 1cc و انتقال آن به پليت مورد نظر

 

6- ريختن محيط كشتها به اندازه 10-15cc در پليتها وهمزدن به صورت 8 انگليسي وصبر كردن به مدت 15-10 دقيقه جهت بسته شدن محيط كشتها

 

7- انتقال محيط كشتها به انكوباتور

 

پليتهاي حاوي محيط كشت پليت كانت آگارواورنج سرم‌آگار به انكوباتور با حرارت 30 درجه سلسيوس به مدت 5روز .

 

پليتهاي سابروز دكستروز آگار به انكوباتور با حرارت 30-20 درجه به مدت 5-3 روز.

 

پليتهاي حاوي مك كانگي آگار به انكوباتور با حرارت 37 درجه بمدت 4-2 روز.

 

وپليت هاي حاوي MRS براي نشان دادن باكتريايي اسيد لاكتيك در گرمخانه 37 درجه به مدت 3 روز

 

نكته: بايد از هر محيط كشت يك نمونه شاهد نيز تهيه كرد تا در صورت آلوده بودن محيط كشت در نتيجه ايجاد اشكال ننمايد.

 

 

 

آزمايش ميكروبي كنسانتره:

 

 

 

1- 3 تا 4 شيشته دربسته مخصوص كشت را كه به هركدام 9 ميلي‌ليتر سرم رينگر ريخته شده و درب‌ آن را بسته و همراه با محيطهاي كشت در اتوكلاو استريل مي‌كنيم.

 

2- بعد از استريل كردن محيط و پليتها و چيدن آنها روي ميز و نوشتن مشخصات نمونه آماده كشت مي‌شود.

 

3- 1 گرم كنسانتره را وزن كرده و در شيشه دربسته اولي ريخته و با آن مخلوط مي‌كنيم رقت 1/0 تهيه مي‌شود (در مجاورت آتش).

 

4- 1ml از شيشه اولي برداشته و در شيشه دوم ريخته و مخلوط مي‌كنيم رقت 01/0 تهيه مي‌شود.

 

5- 1ml از شيشه دوم برداشته و در شيشه سوم ريخته رقت 001/0 تهيه مي‌شود.

 

6- 1ml از هركدام از شيشه‌ها (سر شيشه) برداشته و در داخل پليتها ريخته و روي‌ آنها به مقدار 10ml محيط كشت اضافه مي‌كنيم.

 

محيط كشت هاي مربوطه : PCA ، YGC ، OSA

 

7- صبر مي‌كنيم تا پليتها بندد.

 

8- پليتها را در داخل انكوباتور به مدت 3 روز در دماي 37 درجه قرار مي‌دهيم.