رنگ امیزی بافت های گیاهی

[Matin H-d 18145]

1- جهت بي رنگ كردن بافت، برشهاي تهيه شده را در آب ژاول20% به مدت 15 الي 20 دقيقه بسته به نوع بافت از لحاظ نرم بودن آن و يا خشبي بودنش قرار مي دهيم تا اينكه آماده مراحل بعدي رنگ آميزي شود.

2 - سپس برشها را با آب مقطر شستشو داده كه مي توانيد به دو شيوه عمل نمائيد، يا بافتها را بوسيله قلم مو كوچك از شيشه ساعتي محتوي آب ژاول به شيشه ساعتي ديگر كه محتوي آب مقطر است انتفال دهيد و يا اينكه با يك عدد قطره چكان آب ژاول را از شيشه ساعتي مذكور تخليه كنيد. در اين مرحله ترجيحاً عمل شستشو را دوبار انجام دهيد. چرا كه در صورت باقي ماندن آب ژاول در بافت گياهي، ماندگاري آن كم خواهد شد.

3 - در اين مرحله بافتهاي گياهي را در اسيد استيك 10% به مدت 2 دقيقه به منظور تركيب با آب ژاول باقي مانده در بافت گياهي قرار مي دهيم. قابل توجه است كه اگر بافت به مدت طولاني در اسيد استيك بماند متلاشي مي گردد.

4-حال بافت گياهي آماده رنگ آميزي شده است و تك تك بافتها را به مدت 5 الي 10 در ثانيه در متيلن آبي قرار مي دهيم. در اين مرحله تك تك بافتها را بر روي قلم مو كوچك قرار داده و سپس به آرامي قلم مو حامل بافت را به درون محلول متيلن آبي (5 تا10 ثانيه) فرو مي بريم و سريعاً بافت را به شيشه ساعتي محتوي آب مقطر منتقل مي كنيم.

5- در اين مرحله بافتها را در آب مقطر شستشو مي دهيم.

6- كليه بافتها را در الكل اتانول 70 % به مدت 3 الي 5 دقيقه قرار داده تا رنگ اضافي متيلن آبي شسته شود و تنها بافتهاي چوبي و ليگنيني رنگ آبي را حفظ كنند.

7- در اين مرحله شستشو را به خوبي انجام مي دهيم.

8- سپس كليه بافتها را داخل محلول كارمن جهت رنگ آميزي بافتهاي زنده و عموماً سلولزي به مدت10 الي 15 دقيقه قرار مي دهيم.

9- در انتها بافتها را با آب مقطر فراوان شستشو مي دهيم.

10- حال نمونه آماده مشاهده و بررسي است كه با قرار دادن يك قطره آب مقطر بر روي لام و سپس چند تا از برشهاي تهيه شده را با قلم مو برروي آن قرار داده و يك لامل به طور مورب روي لام مي اندازيم تا حباب هواي كمتري بگيرد، سپس بافت را زير ميكروسكوپ نوري مطالعه مي كنيم .

11- در صورت نياز به نگهداري اين نمونه به جاي يك قطره آب مقطر از گليسيرين استفاده مي كنيم. دور آنرا با لاك ناخن جهت عدم نفوذ گرد و خاك و مواد ديگر مي پوشانيم. اصولاً براي ماندگاري بيشتر از يك قطره چسب كانادابالزام استفاده مي شود ولي بعلت گران بودنش از آن صرف نظر كرده ايم.

12-در انتها پس از آنكه نمونه ميكروسكوپي كاملاً خشك گرديد آنرا داخل جعبه لام نگهداري مي نمائيم .

طرز تهيه آب ژاول:

در آزمايشگاه جهت بيرنگ كردن بافتهاي گياهي و يا جانوري از آب ژاول استفاده ميشود . اما ميتوانيد از آب ژاول تجاري ( وايتكس ) كه به نسبت يك به پنج رقيق شده است، استفاده كنيد . براي تهيه آب ژاول به شيوه زير عمل ميكنيم :

40 گــرم كلروردشو (Ca(Clo)2 + Cacl2) و 20 گرم كربنــات سديم در يك ليتــر آب مقطر كه به مدت 10 دقيقه در دماي 50 الي 60 درجه سانتيگراد حرارت داده ميشود . سپس محلول بدست آمده را صاف ميكنيم.

 

H2O + Ca(Clo)2 + Cacl2 + 2Na2Co3 2Naclo + 2Nacl + 2Caco3

آب ژاول

 

طرز تهيه محلول لوگل يا يد يدوره:

5/0 گرم يد فلزي با 1 گرم يدور پتاسيم در 100 سي سي آب مقطر ، محلول لوگل بدست مي آيد . كه يكي از معرفهاي رنگي دانه نشاسته است و آنرا به رنگ آبي تا بنفش در مي آورد.

 

I2 + IK + H2O محلول لوگل

 

طرز تهيه محلول كارمن زاجي:

1 گرم پودر كارمن با 5 گرم زاج سفيد (KAL(SO4)2.12H2O ) در 100 سي سي آب مقطر كه به مدت 30 دقيقه مي جوشانيم حاصل ميشود سپس بعد از 24 ساعت محلول حاصل را صاف كرده و به آن 5/0 گرم اسيد فنيك جهت جلوگيري از كپك زدن اضافه ميكنيم .

 

طرز تهيه محلول متيلن آبي:

1 گرم پودر وردومتيل را در 1 ليتر آب مقطر حل مينمائيم

موفق باشید.