شناسايی گونه های انگل ليشمانيا با استفاده از نمونه های بافتی حاصل از بيوپسی از زخم به روشrflp-pcr

[RAPUNZEL 10430]

شناسايی گونه های انگل ليشمانيا با استفاده از نمونه های بافتی حاصل از بيوپسی از زخم به روش RFLP-PCR

ليشمانيوز ها گروهی از بيماريها را در بر می گيرند که عامل آن گونه های تک ياخته ای از جنس ليشمانيا می باشد. اين بيماری به صورت گسترده در مناطق مختلفی از جهان مشاهده می شود. بيماری دارای طيف وسيعی بوده که ممکن است به صورت جلدی ، جلدی-مخاطی، جلدی منتشره و احشايی بروز کند. امروزه در بسياری از مناطق جغرافيايی جهان تعيين مشخصات انگل ليشمانيای جدا شده از بيماران برای درمان اوليه و مراقبتهای بعدی از اهميت خاص برخوردار است ، چرا که درمان ليشمانيوز بسته به نوع انگل متفاوت می باشد.

در اين تحقيق ، روش PCR-RFLP نوينی بر روی توالی miniexon ، بخشی از ژنوم KDNA انگل ليشمانيا را پايه آزمايش قرار داده و بطور مستقيم از نمونه های بالينی استفاده شد. اين روش ما را مقدور می سازد که در کوتاهترين زمان بتوان گونه انگل عامل بيماری را بدون کشت ، تشخيص دهيم.

ابتدا از هر بيمار به تعداد 2 نمونه از بافت و ترشحات اطراف زخم گسترش مستقيم تهيه و يکی از لامها را بوسيله رنگ گيمسا رنگ آميزی گرديد. بعد از تائيد وجود انگل در نمونه برداشت شده ، گسترش ديگر را تراشيده و در درون ميکروتيوب ريخته شد. پس از استخراج DNA به روش فنل-کلروفرم با استفاده از پرايمر طراحی شده توالی miniexon از ژنهای KDNA انگل را به روش PCR تکثير و با کمک دو آنزيم Hae III و Eae I قطعه مورد نظر برش داده شد. با استفاده از ژل آگاروز محصول را الکتروفورز کرده و اندازه قطعات از روی مارکر مشخص و گونه انگل شناسايی گرديد.

طبق نتايج بدست آمده از 35 نمونه مورد آزمايش 20 مورد(14/57%) ليشمانيا تروپيکا و 15 مورد (85/42%) مربوط به ليشمانيا ماژور بود.