بهینه سازی بازﻳافت dna از ارقام مختلف گندم

[masi eng 47,044]

بازیافت dna با اهداف متفاوت ژنتیکی صورت می گیرد که یکی از این اهداف توالی یابی dna می باشد. لذا ضرورت دارد که مراحل بازیافت dna برای هرگونه گیاهی بهینه شود.در مقاله پیش رو به معرفی این عمل در مورد گندم خواهیم پرداخت.

به منظور بهینه سازی شرایط باز یافت dna از ارقام مختلف گندم ، تحقیقی در آزمایشگاه ژنتیک مولکولی دانشگاه زابل صورت گرفت .dna این ارقام به روش دلاپورتا استخراج ، پس از تعیین غلظت نمونه ها برای تکثیر قطعات dna الگو از پرایمرهای تصادفی و نیمه تصادفی استفاده شد . پس از الکتروفورز محصولات حاصل از pcr برروی ژل آگارز 1% ، باندهای تکثیری که از کیفیت و وضوح خوبی برخوردار بودند انتخاب و از روی ژل جدا شده و روشهای مختلف برای بازیافت dna استفاده شد که مناسبترین روش بازیافت ، استفاده از pcr مجدد و ته نشین کردن dna حاصله با اتانول بود . که در این روش باند جدا شده از ژل پس از سانتریفیوژ لحظه ای ،به مدت 15 دقیقه در دمای 70- قرار داده شد و سپس در دمای 65 درجه حمام آب گرم قرار داده شد تا باند ذوب شود پس از آن باند ذوب شده را در تریس حل کرده و از این محلول به عنوان ماده اصلی مجدداً برای pcr استفاده گردید . Pcr با همان شرایط pcr اولیه صورت گرفت و محصولات pcr الکتروفورز گردیده و در صورت تشکیل باند،باند حاصله را با اتانول ته نشین کرده که این dna ته نشین شده آماده توالی یابی میگردد .

واژگان کلیدی : گندم،بازیافت،ژل،آگارز

مقدمه:

گندم مهمترین غله ایران ودنیا است.(1)مبدأ اصلی گندم به عنوان مهمترین غله ایران وجهان در جنوب غربی آسیا بوده و10تا 15 هزار سال قبل از میلاد مسیح از این گیاه در تغذیه انسانها استفاده می شده است.(2)دامنه وسیع وسازگاری زیاد این گیاه وهمچنین مصارف متنوع این غله در تغذیه انسانها باعث گردیده که بعنوان مهمترین غله جهان بویژه در کشورهای در حال توسعه وجهان سوم مطرح گرددو حدود 20درصد منابع غذایی مردم جهان را تشکیل دهد.(3) در ایران سرانه مصرف گندم برای هر فرد 150 تا200 کیلو گرم می باشد.(7)با توجه به روند رو به افزایش جمعیت ، در کشورهای در حال توسعه وایران واهمیت اقتصادی وسیاسی تولید این گیاه باید نگاهی ویژه، به تولید واصلاح آن داشت. از طرف دیگر محدودیت ارقام سازگار به خشکی، شوری،سرماومقاوم به بیماریها وآفات وسازگار با شرایط موجود در مناطق مختلف یکی دیگر از عواملی است که تولید این غله را در کشورهای در حال توسعه وایران با بحران روبرو نموده است.(1)ورود مداوم ا رقام اصلاحی از خارج از کشورنیز به علت ایجاد وابستگی کشور به دیگر کشورها مقرون به صرفه نمی باشد.(2) لذانیاز به اصلاح این گیاه وبهره گیری از ارقام محلی ،بومی وخویشاوندان وحشی آنها با توجه به تنوع ژنتیکی بالا ودارا بودن صفاتی چون مقاومت به بیماریها ،آفات ،خشکی ،سرما وشوری