شناسایی و تخلیص شاخص‌های آنتی ژنی هلیکوباکتر پیلوری

[شــاروک 30,242]

هلیکوباکتر پیلوری یک عامل مهم در ایجاد عفونت مزمن مخاط معده، گاستریت مزمن، زخمهای پپتیک و سرطان معده در انسان است. این میکروارگانیسم گرم منفی به شکل S و میکروائروفیل بوده دارای آنزیم اوره آز قوی میباشد. پس از ورود به معده به سطوح اپی تلیوم مخاط معده چسبیده و کلونیزه می شود و به دنبال آن آسیبهای فیزیولوژیک و سیتولوژیک عارض می گردد.

 

روشهای مختلفی برای شناسایی این باکتری وجود دارد از جمله کشت باکتری، اوره آز تنفسی و روشهای سرولوژیک. روشهای سرولوژیک به واسطه سهولت در انجام آن و سرعت در پاسخ دهی از اهمیت ویژه ای برخوردار است. در این تحقیق سعی شد تا با جداسازی باکتری از بیوپسی افراد آلوده آنتی ژنهای اختصاصی این باکتری شناسایی و تخلیص شود.

 

به این منظور پس از کشت باکتری، سوسپانسیون کلنی های خالص آن تهیه و به کمک امواج اولتراسونیک دیواره باکتری لیز شد. پس از تعیین الگوی الکتروفورزی پروتئینهای آن به روش SDS-PAGE، با تکنیک کروماتوگرافی پروتیین های موجود در سوسپانسیون باکتری لیز شده براساس وزن مولکولی از یکدیگر تفکیک و در نتیجه ۱۱ فراکشن به دست آمد. پس از تعیین وزن مولکولی این فراکشنها به کمک روش SDS-PAGE واکنش آنها با سرم افراد کشت مثبت به روش DOT-Blotting بررسی شد.

 

نتایج به دست آمده نشان داد که تمام فراکشنهای به دست آمده از باکتری با آنتی بادیهای موجود در نمونه سرم افراد کشت مثبت و همچنین سرم افراد کشت منفی واکنش می دهد و تنها شدت پاسخ در این دو گروه متفاوت است. همچنین مقایسه الگوی پاسخ فراکشنها در این دو گروه نشان داد که دو فراکشن پاسخ متمایزی نسبت به سایر فراکشنها ایجاد می نماید.

 

یکی از این فراکشنها حاوی پروتیین با وزن مولکولی حدود ۲۸.۱ و دیگری کمتر از ۱۴ کیلو دالتون بود. با توجه به نتایج به دست آمده به نظر میرسد استفاده از این دو فراکشن در تهیه کیتهای ELISA بتواند تا حدود زیادی مشکل جوابهای غیراختصاصی حاصل از کیتهای موجود را که در آن از تمامی پروتیینهای باکتری جهت تشخیص آنتی بادی ضد آن استفاده می شود، مرتفع نماید.